注意：電泳前，禁止將電泳槽附帶的電源導線連接到電泳儀電源上。

1.將接觸膠面的二塊玻璃板用紗布沾著酒精順著一個方向擦，然后晾干，再將清洗干凈的凝膠玻璃放入制膠架上，凹槽玻璃沖外。

2.使制膠槽面板上的密封條平整，合上制膠槽面板，用四個轉向夾子夾緊固定。

3.灌分離膠**上沿約2-3 厘米處。

4.立即加約1cm 的蒸餾水壓上（約2.5 毫升蒸餾水），以隔氧和去氣泡。

5.灌濃縮膠（1mm 厚的膠約7mL，1.5mm 厚的膠約10mL），注意：先用濾紙吸去覆蓋水，再灌膠。

6.立即插入式樣格。

7.待膠凝固后，松開轉向夾子，取出玻璃膠室。

8.裝夾玻璃膠室：在本體兩側裝入玻璃膠室，注意使兩凹口相對。插入斜插板并夾緊（注意使斜插板的大平面與玻璃接觸）。

9.若只跑一塊膠，將一側不跑膠的平凹玻璃互換，其余向上。

10.先在上槽內加入緩沖液150 毫升左右。

11.然后再在下槽內加入緩沖液，**多可加**上槽黑色密封條處（即**多可加緩沖液3200 毫升）。

12.拔掉試樣格。

13.將要測定的樣品進行蛋白質濃度的標化。

①在樣品和緩沖液煮之前，要對每一個樣品的蛋白質濃度稀釋或濃縮為1mg/ml。

②蛋白染料：沒和蛋白結合前，染料呈黃褐色，和蛋白結合后，呈藍色，蛋白濃度越高，染料顏色越藍。

③稱1mg 標準蛋白溶在1ml 水中，制成1mg/ml 標準蛋白溶液。

14.樣品和mark 按著1：1 的體積配樣品緩沖液，放在100 度的沸水中煮三分鐘，注意離心管或扎個眼或用封口膜緊緊纏繞幾圈，防止住崩裂了。

15.加樣品。

16.連接外部恒溫循環器，（嚴禁直接連到自來水管上）

17.電泳：蓋上蓋子，接通電泳儀電源，選擇適宜的電泳參數進行電泳，

18.結束電泳：待電泳的指示劑跑到槽的底部后，停止電泳。先關閉電泳儀電源，然后拔掉電源導線，切斷循環冷卻水，松開斜插板，放掉上槽緩沖液，取出玻璃膠室，用很薄的刀片輕輕的插進凹槽玻璃的頂部與另一塊玻璃之間的縫隙，用薄刀片輕輕向上撬，將上層玻璃輕輕撬開。

19.染色：將有膠板的玻璃板平放在桌上，用刀片從兩側沿著玻璃條劃開。

20.脫色：將染色后的膠片放到脫色液中脫色，開始時，多換幾次脫色液，以后可以多放脫色液過夜，可用脫色搖床過夜脫色，直**膠片背景藍色成完全透明狀，

即可看到清晰的分離條帶。